EMA-qPCR检测金黄色葡萄球菌活菌方法的建立

• 作者: 何光琼 刘强 刘银 向奋飞 张晓娇 陈娟
• 来源期刊: 职业与健康
• 学科: 医学
• 关键词: EMA 实时荧光定量PCR 金黄色葡萄球菌
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 实验·监测与检验
• 页码范围: 1620-1622,1627
• 页数: 4页
• 分类号: R115
• 语种: 中文

摘要

目的 利用叠氮溴乙锭(EMA)结合实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术,建立快速、定量检测金黄色葡萄球菌活菌的方法.方法 菌悬液72℃水浴,每隔1 min取样计数,用不同浓度EMA作前处理后进行qPCR反应,选择最佳处理浓度和曝光时间,样品10倍梯度稀释后做叠氮溴乙锭-实时荧光定量聚合酶链反应(EMA-qPCR),结合平板计数法探索该方法的灵敏度,用表皮葡萄球菌、副溶血性弧菌、福氏志贺菌等验证该方法的特异性,将模拟样品用2种方法检验并比较.结果 水浴14 min及以上能完全杀死活菌,EMA处理浓度≥2μg/mL时PCR结果判定为阴性,曝光时间对实验结果影响不大,菌量的对数值与循环阈值(Ct)有较好的线性关系,且y=-3.59x+40.59,R2=0.988.理论上该方法的最低检测浓度约为36.3 CFU/mL,非金黄色葡萄球菌的Ct值均＞35或无Ct值,普通qPCR实验结果Ct值均低于EMA-qPCR实验结果.结论 EMA-qPCR是一种快速、灵敏度较高、特异性强且能分辨死活金黄色葡萄球菌的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向奋飞	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	3	1	1.0	1.0
2	何光琼	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	2	0	0.0	0.0
3	刘强	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	4	3	1.0	1.0
4	陈娟	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	1	0	0.0	0.0
5	张晓娇	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	1	0	0.0	0.0
6	刘银	成都市龙泉驿区疾病预防控制中心办公室	1	0	0.0	0.0