美洲鲎G因子α亚基的原核表达及临床深部真菌感染检测方法的构建

• 作者: 吴智明 陈少文 周发友 章宏祥 唐晓磊
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 关键词: 侵袭性真菌感染 G因子α亚基 夹心法 诊断
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著|ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 32-37
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.210107

摘要

目的 验证美洲鲎来源的G因子α亚基(G Factor α subunit,GFαSub)用于侵袭性真菌感染(invasive fungal infection,IFI)检测的应用价值. 方法 原核表达并纯化美洲鲎G因子α亚基活性结合区域(葡聚糖天然配基),以该活性结构域包被96孔板作为捕捉元件,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的G因子α亚基作为检测显色元件,正交法构建G因子α亚基夹心法,检测36例肺部IFI患者、52例肺部细菌感染患者和40例健康人血清中(1,3)-β-D)葡聚糖,评估夹心法的检测效能及其与G试验对阳性病例测得值的相关性进行分析. 结果 根据NCBI提供的数据库,合成pET30a-GFαSub252-668表达质粒,并通过IPTG诱导表达、Ni-NAT柱纯化GFαSub252-668蛋白,并使用商品化HRP标记试剂盒对其进行标记.通过正交法确定包被GFαSub252-668蛋白浓度和检测HRP标记的GFαSub252-668蛋白浓度分别为8 ng/ml和16 ng/ml.运用此夹心法检测128例临床血清标本(1,3)-β-D-葡聚糖含量,肺部IFI患者组(175.2±65.8)ng/ml,与细菌感染组(46.3±17.7)ng/ml和健康组(39.4±14.9)ng/ml差异有统计学意义(F=160.1,P＜0.001);根据ROC曲线计算其灵敏度和特异度分别为91.67％(95％CI:77.53％-98.25％)和82.61％(95％CI:73.3％-89.72％);其与G试验36例IFI患者血清中检测(1,3)-β-D-葡聚糖水平具有良好相关性(R2-0.7592). 结论 建立的双GFαSub252-668蛋白夹心法检测(1,3)-β-D-葡聚糖具有较高的灵敏度和特异度,有望成为一种新型的IFI检测手段.