抗鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 孙佳卉 刘志艺 黄聪 李传峰 刘光清 陈宗艳
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅星状病毒 Cap蛋白 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 58-63
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

自2016年以来,鹅星状病毒(GoAstV)已成为当前危害鹅养殖业生产的重要病原体之一,雏鹅均易感,主要引起9～19日龄雏鹅死亡,以雏鹅腿关节肿胀及肾脏尿酸盐沉积导致肾炎为主要病征.建立相应的病原学与血清学检测方法对于防控该病至关重要.为建立基于病毒Cap蛋白的诊断技术,本研究构建了鹅星状病毒去核定位信号肽的Cap基因原核表达质粒pET-30a-Cap,转化BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot检测Cap蛋白的表达.大量表达并纯化重组蛋白后,将其免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测免疫小鼠抗体效价,制备单克隆抗体,并对其进行鉴定.结果显示:获得的重组蛋白分子量约为28 kDa;通过3次亚克隆筛选最终获得5株杂交瘤细胞株1A5G10、1C11B11、5B7G8、9A12B12、9C3E11,抗体效价均可达1:51～200以上;1A5G10、5B7G8、9C3E11重链为IgG1型,1C11B11、9A12B12重链为IgG2b型,轻链均为κ型;制备的单克隆抗体均可与重组蛋白反应或GoAstV发生反应;其中5B7G8株与GoAstV发生反应,1C11B11、9A12B12株与GoAstV发生反应.本研究结果为GoAstV诊断方法的建立以及GoAstV Cap蛋白功能的进一步研究奠定了坚实基础.