干扰长链非编码RNA NEAT1上调miR-126抑制胃癌细胞的生长、间质转换及裸鼠肿瘤形成

• 作者: 陶正贵 杜静虎 田葵 王东华 胡凤琪 陈钰
• 来源期刊: 实验动物科学
• 关键词: 长链非编码RNA 核富集的转录物1 miR-126 胃癌 荷瘤鼠
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 8-16
• 页数: 9页
• 分类号: R735.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2021.02.002

摘要

目的 研究干扰长链非编码RNA核富集的转录物1(NEAT1)上调miR-126抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响.方法 通过RT-PCR分析NEAT1在胃癌MGC-803、SGC-7901细胞和正常胃上皮GES-1细胞中的表达,并检测sh-NEAT1的沉默效率.NEAT1沉默后,EDU染色分析肿瘤细胞的增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室和划痕实验分析肿瘤细胞的侵袭、迁移能力;Western blot分析肿瘤细胞Ki67、Caspase-3、N-cadherin和E-cadherin的表达.荧光素酶报告实验验证NEAT1与miR-126的靶向关系,分析NEAT1/miR-126对胃癌SGC-7901细胞生长和运动的调节影响;通过构建转染sh-NEAT1的SGC-7901细胞的移植瘤模型裸鼠,检测30 d内肿瘤体积及质量变化;免疫组化检测Ki67和Caspase-3的表达,RT-PCR检测NEAT1和miR-126的表达;Western blot检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.结果 NEAT1在肿瘤细胞中的表达水平显著高于正常细胞(P<0.05),sh-NEAT1沉默后,肿瘤细胞NEAT1的表达量显著降低,增殖能力明显受到抑制,凋亡细胞比例显著增高,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力明显减弱,肿瘤细胞中Ki67和N-cadherin表达量明显降低,Caspase-3和E-cadherin的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).荧光素酶报告实验表明NEAT1与miR-126存在靶向关系,sh-NEAT1能显著促进miR-126的表达(P<0.05),miR-126 inhibitor能显著促进sh-NEAT1对SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡.移植瘤模型裸鼠表明sh-NEAT1能够抑制肿瘤体积增大,下调肿瘤组织中NEAT1、Ki67及N-cadherin的表达水平,上调miR-126、Caspase-3和E-cadherin的表达量,肿瘤的质量与对照组相比显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 干扰长链非编码RNA NEAT1能够上调miR-126表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,并通过阻断EMT机制降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力,抑制裸鼠肿瘤的形成.