新血清型流行性出血病病毒荧光定量qRT-PCR与RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 杨振兴 李占鸿 宋子昂 李卓然 李华春 朱建波 廖德芳 杨恒
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 流行性出血病病毒 新血清型 荧光定量qRT-PCR RT-PCR 血清型鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 446-454
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0049

摘要

流行性出血病病毒(EHDV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒.目前世界范围已发现9种血清型的EHDV,2018年笔者在云南芒市新分离到1株新血清型EHDV毒株(YNDH/V079/2018),但尚缺乏该血清型的特异性检测方法.本研究建立了新血清型EHDV核酸检测的实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)和RT-PCR方法.试验结果显示,建立的两种方法均具有良好的特异性与灵敏度,与另外7种血清型EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、中山病病毒(CHUV)、阿卡斑病毒(AKAV)和阴性对照均无交叉反应.对病毒核酸的检测下限分别达到10 copies/μL (qRT-PCR)与102 copies/μL(RT-PCR).临床样品检测显示,qRT-PCR能在动物感染EHDV早期检测鉴定出病毒,更适合应用于检测病毒载量较低的血液样品.RT-PCR的扩增产物可以胶回收测序,进一步了解待测病毒的遗传信息,两种方法辅助使用,为新血清型EHDV的早期快速诊断、流行病学调查和试验研究等提供了有效的技术方法.