犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究

• 作者: 龚成燕 李连峰 陈杰 胡博 赵建军
• 来源期刊: 特产研究
• 关键词: 犬瘟热病毒 N蛋白 H蛋白 IFN-β 双荧光素酶报告系统
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告|Research reports
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16720/j.cnki.tcyj.2021.025

摘要

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0h、8h、12h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性.将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体.重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达.将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性.结果 显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活.Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达.双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P＜0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关.本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础.