重组CFP10-ESAT6蛋白通过TLR信号介导A549细胞抗BCG感染

• 作者: 刘占有 徐兆坤 王健宏 李武
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 结核分支杆菌 重组CFP10-ESAT6蛋白 TLR信号途径 肺泡上皮细胞 炎症因子
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 500-508
• 页数: 9页
• 分类号: S852.618
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0058

摘要

本研究旨在探究重组CFP10-ESAT6蛋白在结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染肺泡上皮细胞过程中对肺泡上皮细胞TLR信号途径及其介导的炎症反应的影响.利用原核表达系统表达纯化Mtb重组蛋白CFP10-ESAT6,使用重组蛋白处理A549细胞,利用CCK-8试剂盒检测重组CFP10-ESAT6对细胞活性的影响;使用重组CFP10-ESAT6和减毒牛分支杆菌BCG处理细胞并设置相应组别,提取细胞总RNA和总蛋白,利用qRT-PCR技术、Western-blot及ELISA方法分别从转录和翻译水平检测A549细胞中TLR信号途径关键分子及其下游炎症因子的表达变化.结果 显示,成功获得高纯度的重组CFP10-ESAT6,并且重组CFP10-ESAT6在一定浓度范围和处理时间条件下能够降低A549细胞的存活率.当BCG或重组CFP10-ESAT6单独处理A549细胞时,细胞中TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)上调,重组CFP10-ESAT6与BCG共处理时,重组CFP10-ESAT6显著(P＜0.05)降低了由BCG刺激所导致的TLR途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB p65、IL-6及TNF-α等炎症因子的表达水平.上述结果表明,重组CFP10-ESAT6可以减轻A549细胞在抗Mtb感染过程中由TLR信号介导的炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据.