长基因间非编码RN A963不同可变剪接体在胃癌细胞系中的表达和作用

• 作者: 杜洪 夏万松 韦四喜 夏英 金泳 李红羽 袁婷 黄海
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 关键词: 胃肿瘤 基因表达 细胞凋亡 长基因间非编码RNA963 可变剪接体 开放阅读框
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 759-765
• 页数: 7页
• 分类号: R735.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.07.003

摘要

目的 探讨长基因间非编码RNA963(LINC00963)不同可变剪接体(V)在胃癌(GC)细胞系中的表达和作用.方法 取对数生长期的GC细胞系AGS、MKN45、HGC-27、MGC803及胃正常黏膜细胞系GES-1,采用常规聚合酶链式反应(PCR)扩增LINC00963、扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和克隆测序验证LINC00963存在于GC中的多个可变剪接体,采用荧光定量PCR检测上述细胞中LINC00963 V表达量、5′cDNA末端快速扩增技术(5′RACE)分析LINC00963 V的转录起始位点、美国国家生物技术信息中心(NCBI)开放阅读框查找器初步分析不同V蛋白编码能力;取对数生长期GC HGC-27细胞,采用基因沉默技术敲低LINC00963-V1,设对照(si-NC)组和敲低组(si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b),免疫印迹分析各组HGC-27细胞中BCL2相关X凋亡调节因子(Bax)、BCL2凋亡调节因子(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.结果 克隆测序及琼脂糖凝胶电泳明确LINC00963基因至少存在3个未见报道的V,分别命名为LINC00963-V1、V2及V3;实时荧光定量PCR结果显示,与GES-1细胞系相比,LINC00963-V1、V2在HGC-27细胞系中高表达(P<0.05);5′RACE探寻到多个转录起始位点,开放阅读框分析显示新发现的V蛋白编码能力较弱;与si-NC组相比,si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b组HGC-27细胞Caspase-3表达增高、Bcl-2表达降低,si-V1-a组和si-V1-b组Bax表达增高(P<0.05).结论 LINC00963存在3个及以上未见报道的V,其中V1在GC细胞系中高表达且有抑制肿瘤细胞凋亡相关基因表达的作用.