高效液相色谱-串联质谱检测RNA中m6A水平方法的建立及其应用

• 作者: 张梦梅 赵莎莎 黄楠 丁苗 孙奋勇
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 核糖核酸 腺苷 T淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 528-534
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112150-20200824-01145

摘要

目的:探讨建立检测RNA中m6A（N6-甲基腺苷）修饰水平的快速、稳定且灵敏的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法以及其应用。方法:RNA发生m6A修饰的水平可以通过RNA中m6A和腺苷（A）的摩尔比值反应出来，通过电喷雾离子源（ESI）正离子多反应监测（MRM）模式测定RNA中m6A和A的含量。通过分析低、中、高3个不同浓度的质控样品（m6A：4、40、400 nmol/L；A：40、400、4 000 nmol/L）对所建方法进行验证。并且应用该方法检测不同条件处理下小鼠脾脏T细胞RNA中m6A的水平。采用 t检验比较两组数据之间的差异。 结果:所建立方法中，m6A和A分别在1~500 nmol/L和10~5 000 nmol/L的范围线性关系良好（ R2>0.99），m6A和A的最低检测限（LOD）分别为1 nmol/L和10 nmol/L，回收率在98.9%和116.5%之间，日内（ n=5）相对标准偏差（RSD）和日间（ n=15，5 d）RSD分别为2.4%~9.5%和4.4%~9.6%。并且应用该方法检测不同条件下培养的小鼠脾脏T细胞RNA中m6A的含量，结果显示，原代CD8 +T细胞RNA中m6A修饰水平为0.271 5±0.017 9，在培养基中加入IL-27的原代CD8 +T细胞RNA中m6A修饰水平为0.251 7±0.015 0，表明原代CD8 +T细胞具有更高的RNA甲基化水平。 结论:本研究建立了一种快速、简便及灵敏的HPLC-MS/MS测定RNA中m6A甲基化水平的检测方法，可用于分析甲基化与疾病之间的关系。