两种新型L-苏氨酸醛缩酶的鉴定及活性检测方法

• 作者: 任思羽 程新宽 张宇辉 庄建文 马龙
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: L-苏氨酸醛缩酶 β-羟基-α-氨基酸 生物合成 活性检测 链霉菌
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 233-240
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0695

摘要

为了实现重要医药中间体p-羟基-α-氨基酸的生物酶法合成,挖掘验证新型的L-苏氨酸醛缩酶.以pET-28a(+)作为表达载体,通过蛋白表达纯化、薄层层析色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)技术分析L-苏氨酸醛缩酶及其催化产物的性质.基于4-氨基-3-肼基-5-巯基-1,2,4-三氮唑(Purpald)显色试剂开发检测醛缩酶的新方法.Streptomyces coelicolor SCO1844(天蓝色链霉菌,S.coelicolor SCO1844)和Streptomyces xinghaiensis SFR7A(星海链霉菌,S.xinghaiensis SFR7A)来源的醛缩酶被证明能够成功地合成p-羟基-α-氨基酸,且均为L-苏氨酸醛缩酶,实现了以苯甲醛和甘氨酸为底物合成1-threo/erythron-苯基丝氨酸的醇醛缩合反应.开发的可视化活性检测方法可以实现醛缩酶的快速鉴定和高通量筛选.两种新型L-苏氨酸醛缩酶的鉴定以及活性检测方法的开发,不仅丰富了生物法合成β-羟基-α-氨基酸的酶库,也为下一步对L-苏氨酸醛缩酶进行分子改造提高其催化活性和选择性奠定了研究基础.