基于重组截短蛋白mp-tGAPDH的微小支原体抗体间接ELISA检测方法建立和应用

• 作者: 付媛 石团员 孙洪超
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 关键词: 嗜血支原体 微小支原体 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学|Animal Science
• 页码范围: 809-815
• 页数: 7页
• 分类号: S858
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2021.05.05

摘要

猪源嗜血支原体(Hemotropic mycoplasma,HM)寄生于猪红细胞表面及骨髓中,引起猪传染性贫血,给我国养猪产业造成危害.近年来病原流行病学调查发现我国流行三种HM,猪支原体(Mycoplasma suis,M.suis猪附红细胞体),微小支原体(M.parvum)和新种Candidate Mycoplasma hemosuis(CMh).且M.parvum在是我国浙江和海南猪群中的主要流行嗜血支原体,目前仅M.suis有血清抗体检测方法报道.本研究根据M.parvum ZJ9330株的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计引物扩增404 bp的部分基因片段、原核表达纯化15 ku截短蛋白mp-tGAPDH,Western-blot表明纯化蛋白mp-tGAPDH与小鼠抗mp-tGAPDH血清有较好的反应性.以mp-tGAPDH为包被抗原,建立了检测M.parvum抗体的间接ELISA方法.特异性实验表明,建立的ELISA方法不与猪圆环病毒病、猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和弓形虫阳性血清交叉反应.重复性实验表明,该ELISA方法批间和批内重复性低于18.4％,表明该法有较好的重复性.用建立的ELISA方法对浙江省上虞地区5个猪场248份临床送检血清进行了检测,M.parvum血清抗体阳性率为36.69％(91/248).本研究建立的间接ELISA方法为猪微小支原体的检测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法.