快速纯化重组腺联病毒的受体结合捕捉方法

• 作者: 陈裴裴 刘晓明 卢会鹏 周晓慧 张鑫宇 夏晓莉 孙怀昌
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 腺联病毒受体 ELP融合表达 受体结合捕捉 重组AAV纯化
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告|RESEARCH ARTICLES
• 页码范围: 621-630
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20200270

摘要

[目的]建立用于重组腺联病毒(AAV)纯化的受体结合捕捉方法.[方法]将AAV受体的多囊肾病(PKD)结构域1和2与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,利用相变循环(ITC)纯化ELP-PKD融合蛋白;分别用昆虫和AAV-293细胞制备rAAV-GFP,与ELP-PKD融合蛋白共孵育后进行ITC,从沉淀复合物提取病毒DNA进行PCR检测;在优化条件下利用ELP-PKD蛋白结合捕捉rAAV-GFP,利用电子显微镜观察、免疫转印和细胞感染试验进行rAAV鉴定.[结果]ELP-PKD融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC纯化的蛋白纯度大于90％;ELP-PKD蛋白能特异结合rAAV-GFP,结合具有pH、温度和时间依赖性,受体结合捕捉方法可在1h内完成,从两种细胞纯化rAAV-GFP的回收率分别为58％和56％;rAAV-GFP洗脱具有pH和温度依赖性,洗脱rAAV-GFP的回收率分别为46％和44％;纯化rAAV-GFP具有AAV的典型形态和结构蛋白.[结论]建立的ELP-PKD结合捕捉法可用于不同细胞源rAAV的快速纯化.