酵母双杂交筛选与星状病毒衣壳蛋白ORF2互作的宿主蛋白

• 作者: 李香雨 于漫 聂梓陶 陈彦如 王嘉会 韩喜彬 赵微
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 关键词: 星状病毒 酵母双杂交 ORF2蛋白 蛋白互作 cDNA文库筛选
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 论著|Original article
• 页码范围: 491-495
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2021.06.003

摘要

目的 筛选人星状病毒?(HAstV)?衣壳蛋白ORF2与宿主细胞互作的蛋白质.方法 构建HAstV?ORF2蛋白的重组载体pGBKT77-ORF2,以其作为诱饵质粒,采用酵母双杂交方法,从人结肠癌细胞Caco-2?cDNA文库中筛选与ORF2蛋白互作的蛋白.以HAstV-1病毒株的衣壳蛋白为模板,通过PCR扩增定向克隆构建诱饵载体pGBKT7-ORF2.通过菌落PCR和测序验证质粒在酵母细胞Y2H中正确表达.明确ORF2蛋白对酵母细胞无毒性,无自激活活性.将含有pGBKT7-ORF2的酵母菌株与靶标Caco-2?cDNA文库进行杂交、筛选、验证及测序.结果 获得15个与ORF2互作的宿主蛋白,分别为FN1、COMMD1、RASAL2、BMP4、RPL11、RBM8A、SUMO1、WWC2、NGDN、HINFP、RPS7、IMMT、UBE2I、EEF1A1和FTL.结论 成功筛选出15个与HAstV?ORF2互作的蛋白,为研究星状病毒与宿主相互作用、ORF2蛋白功能及病毒的致病机制奠定了基础.