利用酵母双杂交技术筛选与wsv112互作的宿主蛋白

• 作者: 刘庆慧 卢翠玉 王中一 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 对虾白斑综合征病毒 wsv 112 dUTPase 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 156-162
• 页数: 7页
• 分类号: S945.4
• 字数: 4031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180604001

摘要

对虾白斑综合征病毒(WSSV)开放阅读框wsv112编码脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTP pyrophosphatase,dUTPase).为研究wsvll2与宿主的互作关系,本研究采用酵母双杂交Gal4系统从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道cDNA文库中筛选与wsv112互作的候选蛋白.以WSSV为模板,构建pGBKT7-112诱饵载体,转化到Y2H Gold酵母菌感受态细胞中,转化菌液涂布到不同缺陷型培养基上,检测诱饵载体的自激性和毒性.将凡纳滨对虾肠道cDNA文库与诱饵菌株pGBKT7-112接合,通过筛选力度不同的缺陷型培养基、颜色反应、PCR、测序鉴定等步骤筛选阳性克隆,将阳性菌株提取质粒,再经过回复杂交实验验证筛选出的阳性质粒与诱饵载体的作用.研究表明,诱饵载体pGBKT7-112无自激性和毒性,可用于酵母双杂交实验;经初筛和回复杂交实验最终得到2个阳性质粒,经过NCBI数据库对比,其编码的蛋白分别与日本囊对虾(Penaeus japonicus)C型凝集素(AGW27416.1)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii) 40S核糖体蛋白S20小亚基蛋白(ALE99171.1)具有37％和98％同源性.本研究为wsv112的调控机制提供新的线索.