芍药内酯苷通过调控微小RNA-149-5p/Wnt1诱导信号通路蛋白1通路对白细胞介素-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用

• 作者: 段贤斌 张强 刘弼 卢小虎 李孝静
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 骨关节炎 软骨细胞 微小RNA
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 骨外科
• 页码范围: 1221-1225
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20201201-01932

摘要

目的:观察芍药内酯苷(AF)对白细胞介素(IL)-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用，并探讨机制是否与调控微小RNA(miR)-149-5p/Wnt1诱导信号通路蛋白1(WISP1)通路有关。方法:分离培养远交群(SD)大鼠膝关节软骨细胞，采用10 μg/L的IL-1β建立软骨细胞损伤模型。根据处理方法不同将软骨细胞分为对照(Con)、IL-1β、IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H、IL-1β+miR-NC、IL-1β+miR-149-5p、IL-1β+si-NC、IL-1β+si-WISP1、IL-1β+AF+anti-miR-NC、IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；流式细胞术和蛋白质印记(Western blot)用于分析细胞凋亡和WISP1蛋白表达；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p和WISP1 mRNA表达。双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-149-5p对WISP1的靶向作用。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析和SNK- q检验。 结果:IL-1β组软骨细胞上清液中IL-6(6.11±0.61比2.54±0.25， q＝26.072， P<0.05)、IFN-γ(53.62±5.33比8.14±0.82， q＝44.989， P<0.05)和TNF-α含量(29.54±2.71比4.21±0.42， q＝44.463， P<0.05)高于Con组，细胞凋亡率(28.65±2.71比8.23±0.81， q＝33.622， P<0.05)、WISP1表达(0.92±0.08比0.45±0.04， q＝22.873， P<0.05)高于Con组，miR-149-5p表达(0.44±0.04比1.00±0.05， q＝30.571， P<0.05)低于Con组。IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H组软骨细胞上清液中IL-6(5.03±0.49、3.95±0.31、2.86±0.27比6.11±0.61， q＝7.887、14.775、23.735， P<0.05)、IFN-γ(37.19±3.21、24.58±2.44、13.54±1.32比53.62±5.33， q＝16.063、28.391、39.184， P<0.05)和TNF-α(21.65±2.17、12.64±1.28、6.95±0.63， q＝14.014、30.017、40.123， P<0.05)含量低于IL-1β组，细胞凋亡率(22.47±2.23、16.98±1.54、10.54±1.12比28.65±2.71， q＝10.175、19.215、29.818， P<0.05)、WISP1表达(0.78±0.07、0.66±0.06、0.53±0.05比0.92±0.08， q＝6.813、12.653、18.980， P<0.05)低于IL-1β组，miR-149-5p表达高于IL-1β组。IL-1β+miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(3.21±0.31比6.19±0.61， t＝13.065， P<0.05)、IFN-γ(16.47±1.68比54.23±5.33， t＝20.270)和TNF-α含量(9.36±0.94比28.46±2.81， t＝19.338， P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组，细胞凋亡率(12.33±1.25比29.65±2.41， t＝19.139， P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+si-WISP1组软骨细胞上清液中IL-6(3.41±0.34比6.22±0.58， t＝12.539， P<0.05)、IFN-γ(17.23±1.72比55.12±5.41， t＝20.023， P<0.05)和TNF-α(10.33±1.08比27.65±2.74， t＝17.642， P<0.05)含量显著低于IL-1β+si-NC组，细胞凋亡率(13.54±1.47比28.61±2.73， t＝11.678， P<0.05)低于IL-1β+si-NC组。miR-149-5p与WISP1直接结合。IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(5.84±0.58比2.71±0.26， q＝20.382， P<0.05)、IFN-γ(46.22±4.31比13.98±1.37， q＝27.042， P<0.05)和TNF-α(25.32±2.51比6.77±0.67， q＝29.011， P<0.05)含量高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组，细胞凋亡率(21.41±2.33比9.68±0.96， q＝17.964， P<0.05)高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组。 结论:芍药内酯苷通过调控miR-149-5p/WISP1通路对IL-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用。