利用单碱基编辑系统定点编辑哈萨克羊MSTN基因的研究

• 作者: 姚旭东 蒙亚琦 任秀美奥 郭延华 唐红 张译元 王立民 周平
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 关键词: 哈萨克羊 单碱基编辑 MSTN
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传育种|ANIMAL GENETICS AND BREEDING
• 页码范围: 2162-2170
• 页数: 9页
• 分类号: S826.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.08.009

摘要

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)可负调控骨骼肌的发育.本研究利用胞嘧啶碱基编辑器(cytidine base editor,CBE)在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子,以期达到敲除MSTN基因的目的 .共设计2条靶向哈萨克羊MSTN基因不同外显子的sgRNAs,分别连接至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin质粒,并与pCMV-AncBE4 max-P2A-GFP质粒共转染哈萨克羊胎儿成纤维细胞,经CruiserTM酶酶切检测、Sanger测序和TA克隆分析.结果 显示,成功筛选出可以在哈萨克羊MSTN基因外显子提前引入终止密码子的2条sgRNAs,其中STOPsg-1靶位点编辑效率为26.7％,STOPsg-2靶位点的编辑效率为6.7％.本研究成功运用CBE(AncBE4 max)技术在哈萨克羊胎儿成纤维细胞MSTN基因编码区实现定点编辑,为培育精确编辑MSTN基因的哈萨克羊奠定基础.