利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎

• 作者: 冯亚杰 吕晨晨 尉翔栋 徐照学 施巧婷 朱肖亭 梁瑞清 滑留帅 王二耀 辛晓玲
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 MSTN基因 基因编辑 CRISPR-Cas9 胚胎
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 131-136
• 页数: 6页
• 分类号: S823|Q789
• 字数: 4706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.02.019

摘要

为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎.从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7 EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证.结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28％;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00％;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40％;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失.综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎.