染料法实时荧光PCR检测牛嵴病毒

• 作者: 师志海 王文佳 王亚州 孟红丽 闫祥洲 成海建 施巧婷 王二耀 徐照学
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛嵴病毒 犊牛腹泻 EvaGreen染料
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1498-1503
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0210

摘要

牛嵴病毒(BKoV)可能是与犊牛腹泻相关的潜在病原,为建立快速检测BKoV的方法,本研究根据BKoV3D基因的保守序列,设计特异性引物对,通过优化反应条件和体系,建立了基于EvaGreen染料检测BKoV的实时定量PCR方法.该方法Ct值与模板在1.08×102～1.08×108copies/μL范围内线性关系良好,扩增效率为106.4％;该方法仅检测BKoV时结果呈阳性,检测其他犊牛腹泻相关病原时结果呈阴性;能检出BKoV的最低检出限为10.8 copies/μL;批内和批间的变异系数均小于2％,重复性好.用该方法对311份采自河南、山东和四川省的犊牛腹泻样本进行检测,河南省BKoV的检出率为7.38％(20/271),其他两省的样本均未检测出BKoV.本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BKoV的检测和流行病学调查提供了有力手段.