鸡源CD40L基因克隆、蛋白表达及生物活性检测

• 作者: 马萌 郑孟加 李晓齐 高丽 曹红 王永强 郑世军
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 鸡 CD40L 法氏囊原代细胞培养 真核表达 生物活性检测 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术|Animal and Veterinary Biotechnology
• 页码范围: 2786-2793
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.200614

摘要

为获得鸡源CD40L (chCD40L)蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH 10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化,获得His-chCD40L蛋白.此外,构建pQM01-chCD40L质粒,转染HEK 293T细胞进行蛋白表达与纯化,获得Strep-chCD40L蛋白.亲和层析纯化的chCD40L蛋白浓度为0.01 mg/mL.为检测chCD40L蛋白的生物活性,分离和培养3周龄SPF雏鸡的法氏囊组织原代细胞,将chCD40L加入细胞培养液刺激细胞增殖,通过Western blotting试验、间接免疫荧光试验、流式细胞术检测,发现该蛋白能够与法氏囊B淋巴细胞表面的CD40结合,说明chCD40L具有生物活性.成功获得chCD40L蛋白,为原代B淋巴细胞体外培养及IBDV野毒分离与诊断奠定了基础.