嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的原核表达、抗原性分析及抗血浆杀菌作用研究

• 作者: 荣娜 康超 孙薇 简思杰 伍娜娜 刘祥
• 来源期刊: 西南农业学报
• 关键词: 嗜水气单胞菌 外膜蛋白OmpK 多克隆抗血清 抗原性 血浆杀菌作用
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产|ANIMAL SCIENCE · VETERINARY · FISHERY
• 页码范围: 1359-1366
• 页数: 8页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2021.6.033

摘要

[目的]本文研究了淡水养殖主要病原菌嗜水气单胞菌外膜蛋白OmpK的免疫学功能,为相关疫苗开发奠定理论基础.[方法]采用生物信息学分析OmpK蛋白的理化性质、结构与功能;利用分子克隆构建OmpK蛋白表达菌株,结合L9(34)正交实验确定其最佳诱导表达条件,通过包涵体洗涤和SDS-PAGE电泳切胶纯化OmpK蛋白;Western blot检测抗血清特异性与效价,ELISA检测OmpK蛋白抗血清对嗜水气单胞菌的体外识别;Western blot分析OmpK蛋白抵抗鱼血浆的杀菌作用.[结果]OmpK为亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构呈桶状,在气单胞菌属间同源性较高,进化相对保守;成功构建OmpK表达菌株,并获得较高纯度的OmpK蛋白,其最佳表达条件为:诱导时菌液浓度OD600 =1.0,IPTG浓度为0.5 mmol/L,28℃诱导8 h;Western blot验证OmpK蛋白抗血清特异性较好,且效价达到1:1600,ELISA显示OmpK蛋白抗血清与嗜水气单胞菌存在体外相互作用;Western blot发现OmpK蛋白可通过表达下调实现抵抗鱼血浆的杀菌作用.[结论]原核表达的OmpK蛋白,可刺激机体产生特异性抗体,与嗜水气单胞菌存在体外相互作用.此外,OmpK蛋白可有效抵抗鱼血浆对嗜水气单胞菌的杀菌作用.本研究为嗜水气单胞菌OmpK蛋白的免疫作用研究与疫苗的开发奠定基础.