六种水稻病毒一步法多重RT-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 黄静 王晨一 兰彬源 丁新伦 张帅 吴建国
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻病毒 多重RT-PCR 病毒检测
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告|Articles and Letters
• 页码范围: 619-627
• 页数: 9页
• 分类号: S668.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2022.04.001

摘要

农业生产上水稻(Oryza sativa)病毒病的发生大多为复合侵染,仅通过病毒病症状学的诊断往往很难准确分辨,因此开发快速精准诊断多种水稻病毒病的检测技术,对于水稻病毒病害的精准测报具有重要应用价值.基于此,本研究根据当前我国南方农业生产上常见的6种水稻病毒,即水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)、水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)、水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus,RDV)、水稻锯齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的外壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列,设计了特异性检测引物,建立了可同时检测6种病毒的一步法多重逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其结果表明一步法多重RT-PCR检测反应体系(总体系20μL)中,RSV上下游引物浓度为10μmol/L的体积加量为0.6μL、RDV为0.4μL、RGSV为0.3μL、RRSV为0.4μL、RBSDV为0.6μL、SRBSDV为0.2μL;Onestep RT/Taq Mix的用量确认为0.75μL,5×反应缓冲液用量为4μL,模板量为1μg.多重RT-PCR参数设定为RNA反转录50℃30 min;预变性94℃2 min;94℃变性30 s;退火温度58℃,30 s;72℃延伸1 min,35个循环;72℃终延伸10 min.研究结果表明该体系可同时高效精准地检测6种水稻病毒,极大地提高了检测效率;该方法可广泛应用于实验室精准检测、田间水稻病毒病和传毒介体的检测,也为相关产品的研发提供技术支持和参考依据.