FLAG Full-down技术联合液质质谱分析筛选FOLD4相互作用蛋白初步研究

• 作者: 黄勤淼 刘燕辉
• 来源期刊: 社区医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: POLD4 相互作用蛋白 FLAG Pull-down技术 液质质谱分析
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著|EXPERIMENTAL REPORT
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: R730.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19790/j.cnki.JCM.2022.01.04

摘要

目的 筛查与DNA聚合酶delta(polδ)最小亚基POLD4相结合的蛋白.方法 构建携带FLAG标签的POLD4融合表达质粒FLAG-POLD4-pcDNA3,转染293T细胞表达FLAG-POLD4融合蛋白,通过FLAG Pull-down技术沉淀出POLD4结合蛋白并进一步通过银染法确认差异蛋白,最后切取条带酶解后进行离子井液质联用系统质谱分析.结果 采用FLAG-pcDNA3载体构建FLAG-POLD4-pcDNA3质粒转染293T细胞并通过蛋白质印迹法验证POLD4过表达成功.通过FLAG Pull-down技术成功沉淀出POLD4蛋白,并进一步通过银染法证实了pcDNA3组与FLAG-POLD4-pcDNA3组存在差异蛋白,最后通过液质质谱分析筛选出新的可能与POLD4相结合蛋白14个.结论 FLAG Pull-down技术联合液质质谱分析初步筛选出与POLD4新的可能相结合的蛋白,为进一步研究POLD4的功能提供参考.