香梨果萼黑斑病菌Alternaria alternata遗传转化体系的建立及GFP标记菌株的获得

• 作者: 宋博 张丽娟 朱晓锋 徐兵强 艾米都拉·克尤木 阿布都克尤木·卡德尔 杨森
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香梨果萼黑斑病 链格孢 原生质体 遗传转化
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法|EXPERIMENTAL METHOD
• 页码范围: 97-103
• 页数: 7页
• 分类号: S432.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000491

摘要

为建立香梨果萼黑斑病菌链格孢(Alternaria alternata)的原生质体遗传转化体系,本实验以香梨果萼黑斑病菌强致病性菌株LI1为供试材料,研究菌龄、酶系统、酶解时间等对链格孢菌原生质体制备的影响.链格孢菌菌丝在CM液体培养基中培养20 h,以0.7 mol·L-1 NaC1为稳渗剂,1％裂解酶+1％崩溃酶+1％蜗牛酶的酶液组合下,28℃酶解4h,原生质体制备效率最高.通过PEG/CaCl2介导法将含有潮霉素B抗性基因和绿色荧光蛋白基因的质粒转入链格孢菌LI1,转化子生长表型及外源基因的PCR鉴定结果表明抗性基因已成功整合到香梨果萼黑斑病菌中.成功建立了香梨果萼黑斑病菌链格孢菌的原生质体遗传转化体系,并成功获得GFP标记菌株,为病原菌侵染定殖过程及致病机制研究奠定了基础.