Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析

• 作者: 刘振忞 孔晓燕 沈炼桔 龙春兰 刘星 魏光辉
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B 基因敲除 基因型鉴定 尿道下裂 动物模型
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 论著|Original article
• 页码范围: 152-159
• 页数: 8页
• 分类号: R695
• 语种: 中文
• DOI: 10.16781/j.CN31-2187/R.20210861

摘要

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响.方法 根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb+/-)小鼠;Mafb+/-小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb-/-)胎鼠.收集雄性Mafb-/-胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态.结果 成功构建、繁育Mafb+/-小鼠并得到雄性Mafb-/-胎鼠.免疫荧光检测结果显示雄性Mafb-/-胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb-/-胎鼠为尿道下裂表型.结论 成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础.