淋巴细胞活化基因-3敲除(Lag-3-/-)小鼠构建及初步表型分析

• 作者: 万志鹏 万颖寒 何敏珠 奚骏 孙瑞林 慈磊 沈如凌 王珏 费俭 龚慧
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Lag-3 CRISPR/Cas9 基因敲除 刀豆蛋白
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 49-57
• 页数: 9页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 5404字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2020.01.008

摘要

目的 构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型.方法 利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证Lag-3基因敲除小鼠体内Lag-3基因敲除效果;通过建立ConA诱导的肝损伤模型研究Lag-3基因在体内的功能.结果 PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的Lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(Lag-3-/-)经刀豆蛋白(ConA)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag-3阳性细胞.表型分析发现,Lag-3基因的缺失显著减少了ConA诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了ConA诱发的急性肝损伤情况.结论 成功构建Lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag-3缺失可以显著缓解ConA引发的肝损伤的发生.