猪脂肪酸结合蛋白4启动子的克隆及转录活性分析

• 作者: 刘可可 钟洁 李红强 张瑾 东方阳 毋文静
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 猪 脂肪沉积 启动子 脂肪组织特异性 转录调控
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文|RESEARCH PAPERS
• 页码范围: 283-289
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2022.02.0007

摘要

该研究旨在解析猪(Sus scrofa)脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因的转录调控机制,并获得猪脂肪组织特异性启动子元件.以6月龄大白猪为材料,通过荧光定量PCR结合Western blot证明了猪FABP4为脂肪组织特异性表达较强的基因,并分析推断其核心启动子区位于-2115 bp-2066 bp;克隆得到从起始密码子开始到其上游的870 bp、2914 bp、5060 bp片段,分别构建了双荧光素酶报告载体并将其命名为pGL3-F-1 Kb/3 Kb/5 Kb,分析发现pGL3-F-3 Kb在脂肪细胞中的活性最高,而在非脂肪细胞中无活性;通过与脂代谢密切相关转录因子(C/EBPα、KLF4和C/EBPβ)共转染发现,C/EBPα正调控FABP4转录活性,而KLF4和C/EBPβ负调控FABP4的转录活性.研究表明,猪FABP基因的起始密码子上游3Kb片段具有脂肪组织特异启动子活性,可以用于构建脂肪组织特异性基因修饰猪.