猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

• 作者: 万颖 周改静 麻园 石正旺 肖书奇 罗俊聪 宋锐 曹丽艳 杨波 王丽娟 田宏 郑海学
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 抗体检测 阻断ELISA
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 1173-1181
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.04.017

摘要

旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法.本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验.对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较.结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL-1,血清最佳稀释比例为1:1;酶标抗体的最佳工作浓度为1 ∶ 5 000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1:16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1:32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10％,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致.综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测.