半理性改造提升细菌漆酶Lac15的催化活性

• 作者: 谢雅楠 王瑞 李治 李杰 方泽民 房伟 张学成 肖亚中
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 细菌漆酶 Lac15 半理性改造 活性 特异性
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告|RESEARCH ARTICLES
• 页码范围: 1501-1512
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20210502

摘要

[目的]漆酶可氧化各种底物,在多个工业领域有很好的潜在应用价值.Lac15是一种微生物漆酶,已表现出可观的应用潜能,可望通过蛋白质工程改造提升和拓展其应用.[方法]通过基于结构分析的半理性改造策略,选取推测与电子/质子转移或底物结合直接或间接相关的位点进行定点突变,并测定突变酶对各种底物的活性及酶学性质.[结果]部分突变体对某些底物的活性显著提升,其中D216N对ABTS的催化效率提高了1.0倍,R178V和K433T对多巴胺的催化效率分别增加了1.2和11.1倍.同时,这些突变体保留了野生型酶在应用中的优点如中性最适pH和盐促活等性质.[结论]利用基于结构的半理性改造方法,可改善漆酶Lac15对某些底物的活性.漆酶中的一个保守Asp,对应于Lac15中的D216,可作为提升以ABTS为底物或介体时漆酶活性的一个共同改造目标.