摘要:

利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolin α.首先构建重组穿梭质粒rBacmid Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolin α;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性.Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96 h时获碍了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolin α具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性.猪Ficolin α在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性.本研究可以为猪Ficolin α的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础.

摘要:

目的:构建人乳头瘤病毒58型(hpy58)衣壳蛋白L1的杆状病毒-昆虫细胞表达系统.方法:用杆状病毒-昆虫细胞表达系统大量表达HPV58L1蛋白,并用HPV58L1病毒相似颗粒(VLP)免疫BALB/c小鼠制备特异性抗血清.结果:HPV58L1蛋白在SF9细胞中被高效表达,其相对分子质量为55kD;CsCl超速离心结合蔗糖密度超速离心可纯化此蛋白.在电镜下可见纯化的病毒衣壳蛋白L1形成VLP.用其免疫小鼠制备的相应抗体能与HPV58L1特异性结合.结论:成功表达了HPV58衣壳蛋白L1,并制备出高滴度的抗体.

摘要:

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析.方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(pAc-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化.运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性.通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成.结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性.小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性.结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础.

摘要:

真核细胞大部分生命活动是通过复合体催化的.因此,系统了解这些复合体的生物学功能,将在健康和疾病方面具有重要意义.由于内源性复合体存在低丰度和异质性特点,因而直接提取复合体存在一定的困难.杆状病毒-昆虫细胞表达系统可成功表达复合体,为研究复合体的结构和功能提供新的手段.综述近年来利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统进行蛋白质复合体结构和功能研究的进展.

摘要:

目的：采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获取可溶性 His-Tat-Vp3融合蛋白,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建重组质粒 pFastBacTM1-TAT-VP3,转化DH10Bac 感受态细胞,获得杆状病毒质粒,转染 Sf9昆虫细胞,得到重组杆状病毒,纯化并扩增该病毒。用最适滴度的病毒刺激 Sf9细胞以诱导 His-Tat-Vp3蛋白表达,经 SDS-PAGE和 Western bolt鉴定,获得分子质量约21 kDa 的融合蛋白。采用 MTT 实验与流式细胞技术检测500、1000、2000 nmol/L的融合蛋白抑制肿瘤细胞(HeLa细胞)增殖及促凋亡的活性。结果：通过昆虫表达系统成功表达及纯化出Tat-Vp3融合蛋白,其中1000、2000 nmol/L融合蛋白组可显著抑制肿瘤细胞的增殖,并提高细胞的凋亡率。结论：成功构建 His-TAT-VP3融合蛋白昆虫系统表达载体,在昆虫表达系统中可诱导性可溶性高表达,所获融合蛋白能显著抑制 H eLa细胞的增殖,并促进其凋亡。

摘要:

目的在昆虫细胞中同时表达HCV的核心蛋白C和包膜蛋白(E1、E2)以形成病毒样颗粒(VLP).方法利用PCR技术得到HCV 的核心蛋白和包膜蛋白基因,用基因重组技术分别构建表达HCV C、E1和E2蛋白的重组杆状病毒,用SDS-PAGE电泳分析HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达.电镜观察昆虫细胞内VLP的形成.结果得到了能表达HCV C蛋白和同时表达E1、E2蛋白的重组杆状病毒reBV/C和reBV/E1、E2.reBV/C和reBV/E1、E2共感染的昆虫细胞同时表达了C、E1和E2蛋白,分子量分别为20kD,35kD和66kD.电镜观察到表达HCV结构蛋白的昆虫细胞质中存在大量的直径为40～60nm的VLP,对照细胞无此结构.结论在昆虫细胞中表达的HCV C、E1和E2蛋白可自行装配成HCV样颗粒.