摘要:

本发明公开了一种TRPM7基因及其表达产物的应用，用于制备肝癌治疗的产品。本发明的TRPM7基因及其表达产物可作为制备治疗肝癌药物的靶基因，提供新的肝癌治疗途径。

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目的 研究跨膜蛋白35(TMEM35)基因在肝癌细胞生长、细胞周期中的作用,探讨跨膜蛋白TMEM35作为潜在肝癌治疗靶点的可行性.方法 利用跨膜蛋白二级结构预测工具SPLIT对TMEM35蛋白的二级结构进行分析；利用实时定量多聚酶链反应技术检测TMEM35基因在肝癌患者癌组织及相应癌旁组织中的表达情况；采用化学合成干扰小RNA片段(siRNA)干扰TMEM35基因在肝癌细胞MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,通过软琼脂克隆形成实验观察肝癌细胞非贴壁依赖性克隆生长情况,流式细胞术分析细胞周期；通过蛋白功能相互作用网络数据库STRING推测TMEM35蛋白发挥相应功能的搭档基因.结果 TMEM35为具有4个跨膜结构域的四跨膜蛋白,实时定量多聚酶链反应检测发现TMEM35基因在肝癌中表达紊乱,其中与相应癌旁组织相比较,TMEM35在14例癌组织中表达显著上调,在20例癌组织中表达显著下调(P＜0.05).针对TMEM35基因设计合成siRNAs能够特异性沉默TMEM35基因在肝癌细胞株MHCC-97H、MHCC-97L中的表达,并且肝癌细胞在软琼脂培养条件下,形成的克隆显著减少.流式细胞术分析发现干扰TMEM35基因表达,能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G1期增多,S期减少.结论 TMEM35基因编码具有四跨膜结构域的膜蛋白,在肝癌细胞生长中发挥重要作用.

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目的 探讨母系胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)基因在肝癌中的表达及siRNA干扰后对肝癌细胞Hep3B生长、凋亡的影响.方法 利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和实时定量PCR技术检测MELK基因在肝癌和癌旁组织中的表达差异；评价MELK与肝癌早期指标甲胎蛋白(AFP),δ1样同系物(DLK1)在48例肝癌样本中表达的关系；采用化学合成siRNA沉默内源性MELK基因表达,分析肝癌细胞Hep3B的生长活性、凋亡.结果 在半定量PCR检测的72例肝癌患者中,55例癌组织中MELK基因mRNA的表达水平高于相应癌旁组织；实时定量PCR结果显示MELK基因在肝癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P ＜0.001).MELK、AFP、DLK1在肝癌样本中的阳性率分别为66.7％、50％、54.2％,MELK在肝癌中的阳性比例高于AFP、DLK1；干扰MELK基因在肝癌细胞Hep3B中的表达可抑制细胞生长.结论 MELK激酶作为胚胎干细胞标志性基因在肝癌发生时高表达,是治疗肝癌的潜在靶基因.

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本发明公开了一种MELK基因及其表达产物的应用，用于制备肝癌诊断及治疗的产品。本发明的MELK基因及其表达产物，可作为诊断肝癌的特异标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速；本发明的MELK基因及其表达产物，还可作为制备治疗肝癌药物的靶基因，提供新的肝癌治疗途径。

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本发明公开了一种ARID1A基因及其编码蛋白产物的应用，用于制备诊断肿瘤的产品和治疗肿瘤的药物。本发明的ARID1A基因及其编码的蛋白产物可作为诊断肿瘤的特异性标志基因，使肿瘤的诊断更加快速、准确；本发明的ARID1A基因及其编码的蛋白产物还可用于制备抑制肿瘤细胞生长、转移的药物，为肿瘤的治疗提供新的途径。

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本发明公开了一种ARID1A基因及其编码蛋白产物的应用，用于制备诊断肿瘤的产品和治疗肿瘤的药物。本发明的ARID1A基因及其编码的蛋白产物可作为诊断肿瘤的特异性标志基因，使肿瘤的诊断更加快速、准确；本发明的ARID1A基因及其编码的蛋白产物还可用于制备抑制肿瘤细胞生长、转移的药物，为肿瘤的治疗提供新的途径。

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目的 建立可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型.方法 利用脂质体将荧光素酶表达载体pGL3(LUC/NEO)转染至人肝癌细胞株SMMC-7721、Huh-7、Hep3B、MHCC-97H、HCC-LM6、PLC/PRF/5中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆.根据体外生物发光情况及细胞的生长特性,从中挑选合适克隆,进行裸鼠皮下接种,建立肝癌移植瘤模型.利用活体成像系统监测肿瘤的生长转移情况,并对肝脏组织进行HE染色分析肿瘤细胞的生长分布特点.结果 建立了6株肝癌细胞株的荧光素酶基因稳定表达的亚克隆,并且体外验证了各种细胞株中的荧光素酶活性情况；裸鼠皮下成瘤实验显示了SMMC-7721Luc+、Huh7Luc+、PLC/PRF/5Luc+、MHCC-97HLuc+稳定细胞具有成瘤特性；裸鼠肝脏原位注射肝癌细胞(SMMC-7721Luc+、MHCC-97HLuc+、HCC-LM6Luc+、PLC/PRF/5Luc+),利用活体成像系统能够有效对活体肿瘤生长情况进行监测；裸鼠脾动脉注射肝癌细胞(MHCC-97HLuc+、PLC/PRF/5Luc+),利用活体成像系统能够监测到小鼠肝癌模型的生长状况,之后处死小鼠,对肝脏组织HE染色发现肝癌细胞局部分布于肝脏中.结论 本研究成功地构建了可用于活体成像的小鼠肝癌移植瘤模型,模型稳定可靠、直观、灵敏,为肿瘤生长转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供了重要工具.

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本发明公开了一种CSNK1G3基因及其表达产物的应用，用于制备肝癌诊断及治疗的产品。本发明的CSNK1G3基因及其表达产物，可作为诊断肝癌的特异性标志基因，使肝癌诊断更加准确、快速；本发明的CSNK1G3基因及其表达产物可作为制备治疗肝癌药物的靶基因，提供新的肝癌治疗途径。

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本发明公开了一种TRIM28基因及其表达产物的应用，用于制备肝癌治疗的产品。本发明的TRIM28基因及其表达产物可作为制备治疗肝癌药物的靶基因，提供新的肝癌治疗途径。

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目的:观察手法结合干扰电加磁热振治疗颈型颈椎病的临床疗效.方法:将60例患者随机分为观察组和对照组各30例.观察组采用手法结合干扰电加磁热振治疗,对照组采用手法与干扰电治疗,观察两组临床疗效.结果:观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者的NDI、VAS评分均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组治疗后的NDI、VAS评分显著低于对照组(P<0.05).结论:手法结合干扰电加磁热振治疗颈型颈椎病疗效确切,能改善患者的主要临床症状,值得临床推广.