摘要:

利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法.根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法.通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测.结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10 -1TCID50/mL,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL.应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便.表明建立的RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断.

摘要:

牛病毒性腹泻病(BVD-MD)一直严重影响着规模化牧场的发展,给规模化牧场的生产造成了巨大的经济损失.旨在通过BVD-MD在规模化牧场中各阶段牛群的净化筛查数据,探索适合黑龙江省主要奶牛养殖基地的BVD-MD防控和净化思路,为从根本上减少该病的发生提供借鉴和参考.

摘要:

本研究旨在建立一种灵敏度高、特异性强、重复性好,能快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法.根据BVDV的E2基因保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了检测BVDV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.将标准阳性样品10倍梯度稀释检测灵敏度,用能感染奶牛的其它病毒做对照检测特异性,用临床样本检测重复性.结果表明,该方法与能感染奶牛的其它几种病毒均无交叉反应,检出敏感度达4.87×101 copies/μL,比常规PCR检测方法高10倍.同时检测了5个规模化奶牛场送检的67份奶牛腹泻样本,其BVDV检出率为46.27％(31/67).本研究成功建立了BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为BVDV的快速诊断和定量分析提供了技术支撑,具有很好的应用前景.

摘要:

根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立3种病毒的三重RT-PCR方法.用这3对引物对同一样品中的BVDV、BRSV和BPIV-3核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果显示:可同时扩增BVDV的466 bp,BRSV的735 bp和BPIV-3的258 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BHV-3和10 pg的BRSV模板.用37份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示:两者的总符合率为100％.结果表明:建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断.

摘要:

[目的]疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等，在冬季牧草严重缺乏的时节，牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降，甚至死亡，每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元，是危害最严重的毒草。目前，我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛，资源丰富，如何改善草地生态，合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来,随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果，还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等药物使用。目前，国内在对苦马豆素抗肿瘤、调节机体免疫方面研究较热，但是,对苦马豆素在抗病毒活性、作用机理方面的研究尚无相关报道。为了探讨茎直黄芪中生物碱苦马豆素（swainsonine，SW）抗牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）的作用机制，明确其体外抗病毒作用效果，为抗BVDV的药物筛选提供参考依据。[方法]利用细胞培养技术，采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法测定不同浓度SW对牛肾原代细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)的毒性作用，确定药物的安全浓度和TD 50，并分别采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、药毒作用2 h后加入、感染病毒同时给药后再加药四种作用方式，检测不同浓度SW对BVDV入侵的阻断作用、复制的抑制作用、直接杀伤作用和综合作用，并计算不同作用方式下的治疗指数。[结果]结果显示：SW浓度小于0.256μg·mL-1范围内对MBDK细胞无毒性作用，在大于0.512μg·mL-1浓度下MBDK细胞表现出一定程度的病变,TD 50为2.512μg·mL-1，按Reed-Muench 氏法计算BVDV TCID 50为10-4.7/0.1mL；在体外随苦马豆素质量浓度的增加,其抗BVDV作用具有很好的量效关系,且与作用方式有关，比较四种作用方式下的治疗指数1.05、2.47、2.08和3.21，说明SW对BVDV的综合作用（65.29%，P＜0.01）和复制（65.05%，P＜0.01）的抑制作用较好，亦有一定的直接杀伤作用，但对其入侵的阻断作用不佳。[结论]SW在体外有良好抗BVDV活性作用，并推测苦马豆素（SW）抗病毒的主要效应可能是SW能进入细胞内抑制BVDV的复制增殖以及直接灭活游离BVDV而发挥作用。

摘要:

牛病毒性腹泻病是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）感染引起的一系列临床疾病，其感染率高、流行地区广泛，且因其免疫抑制性而对养牛业造成了严重威胁。接种疫苗可以帮助牛只建立完全有效的抵抗力，并阻断牛群个体间的传播途径，而去除牛群的持续感染牛只及其它外部潜在传染源，是保障牛群长期安全的关键。根据我国BVDV的流行状态和免疫预防基础，对我国牛群净化BVDV的可行性及适用策略进行分析，为我国防控和净化BVDV提供了思路。