BVDV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用

• 作者: 刘萍 常秋燕 李林杰 王悦萦 郭富城 马忠仁 马晓霞 马鹏
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RT-PCR SYBRGreenⅠ荧光定量PCR 应用
• 年，卷（期）: 2017,（z1）
• 页码范围: 49-53
• 页数: 5页
• 分类号: S432.4
• 字数: 3702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.S1.009

摘要

利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法.根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法.通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测.结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10 -1TCID50/mL,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL.应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便.表明建立的RT-PCR方法和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断.