摘要:

为成功表达PRRSV GZJL株GP5蛋白,本研究设计合成一对引物,并以PCR方法从阳性重组质粒pMD18-T-GP5中扩增得到PRRSV GZJL株GP5基因片段中的79～600 bp即dGP5.将dGP5基因连接至原核表达载体pET-32a(+),并转化入表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,阳性菌株进行IPTG诱导表达,纯化的融合蛋白His-dGP5应用SDS-PAGE和Western-blotting方法进行分析,结果表明,本研究成功构建了原核表达菌株,其所表达的融合蛋白His-dGP5的分子量约为402 kDa且可被PRRSV阳性血清所识别.这为进一步研究PRRSV新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基础.

摘要:

根据猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的全基因组序列,设计合成一对特异性引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法.对两份疑似病料进行检测,结果两份均为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒阳性.结合流行病学,临床症状以及病理解剖变化,诊断为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染.

摘要:

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(sFcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法.利用建立的该ELISA方法对感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)血清进行检测,结果显示,猪感染PRRSV后,血清中sFcγRⅢ的水平明显增高,因此sFcγRⅢ的水平可能作为PRRSV感染的预警标志.该研究结果为进一步阐释FcγRⅢ在PRRSV感染中发挥的作用奠定了基础.

摘要:

参照GenBank上登录的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)美洲型AF494042株ORF5基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR扩增出PRRSV河南09分离株(HN-09)的ORF5基因,经与pGEM-T Easy载体连接后,筛选出阳性重组质粒进行序列测定,并利用DNASTAR软件对序列进行分析.结果表明,扩增片段长度为721 bp,与预期目的片段大小一致,测序验证其为PRRSV的ORF5基因.序列分析表明,HN-09株与AF494042的同源性为93.5%,与山西、山东近年分离株的同源性为97.8%～99.2%,与河北、安徽、黑龙江等省分离株的同源性为93.4%～98.7%,但与2004年河南分离株的亲缘关系较远,其同源性为88.7%.用ANTHEPROT软件分析HN-09株和AF494042株编码蛋白质氨基酸的组成和二级结构的含量及分布,结果表明,HN-09株中碱基的突变,导致其氨基酸序列与美洲型有所不同,形成的二级结构略有差异,但二级结构元件的大致分布与美洲型相同.

摘要:

用RTPCR方法从河南分离的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)变异株(HN071)中扩增ORF5全长基因,将其克隆至pMD19T载体.测序结果表明,该序列与标准美洲株VR2332同源性为89%,与我国早期分离的BJ-4株同源性为88%,与HB1、JXAI变异株同源性为96%和99%.将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX6p1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.SDSPAGE和Western-Blot结果表明,成功表达了41.5 kD的融合蛋白.

摘要:

为了解广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株ORF5基因遗传变异情况,采用RT-PCR对2018年采自广东部分地区疑似患有PRRS的猪肺组织样品进行PRRSV ORF5基因扩增以及克隆测序,并进行生物信息学分析.结果表明,成功扩增出18株PRRSV流行毒株的ORF5基因片段.ORF5基因序列分析表明,18株PRRSV流行毒株ORF5基因核苷酸同源性为83.7％～99.8％,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性为62.1％～99.8％.基于ORF5基因的遗传进化树分析表明,18株PRRSV流行株均为美洲型毒株.其中,10株与以JXA1为代表的高致病性毒株亲缘较近,2株与新型高致病性毒株FZ16A相似;1株与以NT1为代表的疫苗返强毒株亲缘较近,1株与以R98为代表的疫苗毒株亲缘性较近,4株与广东新报道的GM2和QYYZ毒株亲缘性较近.DNA推导氨基酸序列分析表明,18株流行株的氨基酸序列与国内已报道的代表株相比发生不同程度的变异,GP5抗原表位上存在着差异.研究结果揭示了广东地区PRRSV有新型强毒株、重组毒株以及疫苗返强毒株的流行,提示养殖者谨慎、合理使用疫苗,防止疫苗毒株返强和毒株重组,为该地区防控PRRS提供参考.

摘要:

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(sFcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法.利用建立的该ELISA方法对感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)血清进行检测,结果显示,猪感染PRRSV后,血清中sFcγRⅢ的水平明显增高,因此sFcγRⅢ的水平可能作为PRRSV感染的预警标志.该研究结果为进一步阐释FcγRⅢ在PRRSV感染中发挥的作用奠定了基础.

摘要:

为了解辽宁地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等几种猪常见繁殖障碍病原感染情况,应用已建立的同时检测3种病原的多重PCR检测方法.在2011年1月至2013年6月期间,对来自辽宁省沈阳、大连、鞍山等16个市县地区的猪场和屠宰场的送检样品进行检测,结果发现2011、2012和2013年PRRSV的阳性率分别为9.28％,27.3％和0.6％,3年平均阳性率为12.1％;PCV2的阳性率分别为59.2％,72％和85.67％,3年平均阳性率为69.8％;PRV的阳性率分别为0.4％,2.17％和0％,3年平均阳性率为0.68％.表明辽宁各地猪场有不同程度的3种病原混合感染情况.

摘要:

为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒( PRRSV)非结构蛋白1α( nsp1α),以BJ-4 PRRSV nsp1α真核表达质粒pcDNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体pET -28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)。 SDS–PAGE结果显示,nsp1α以包涵体形式高效表达,重组蛋白大小约为20 ku；Western blot结果显示,表达的重组蛋白能与小鼠抗His标签单克隆抗体反应；包涵体蛋白复性后,ELISA方法检测结果显示,重组蛋白能与1∶6400稀释的PRRSV阳性血清反应。表明成功表达了nsp1α蛋白,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。

摘要:

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是造成全球养猪业巨大经济损失的病毒性传染病,由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起.自从该病被发现以来,PRRSV病毒的基因组结构、蛋白功能等生物学、致病性、传播方式等流行病学及疫苗和防控进行了深入的研究,然而目前商业化的疫苗对PRRS的预防效果并不理想,这可能与PRRSV的免疫逃避和对机体免疫机能的抑制有关.PRRSV可通过抗原逃避、延迟中和抗体产生和T细胞免疫、抗体依赖性增强、抑制树突状细胞功能、诱导调节性T细胞分化等多种途径逃避和抑制机体的天然免疫和适应性免疫应答,导致病毒的持续性感染.