摘要:

以聚苯乙烯微球为载体,利用滚环放大技术,发展了一种以串联G-四链体-血红素DNA酶催化及T-Hg2+-T特异识别为基础的"Turn-on"型Hg2+高灵敏生物传感器,用于尿液样本中Hg2+的高效检测.通过链霉亲和素和生物素的特异性结合,将富T生物素化Hg2+捕获探针固定至微球表面,当Hg2+存在时,通过形成T-Hg2+-T结构将含有G-四链体互补序列的环化单链DNA序列捕获至微球表面,滚环扩增后在微球表面产生大量包含串联G-四链体的DNA序列.当氯化血红素(Hemin)插入G-四链体后,形成具有增强催化活性的G-四链体-hemin DNA酶,可催化ABTS和H2 O2反应形成ABTS·+,在420 nm处具有最大吸收.考察了多种因素对检测体系的影响,在最优实验条件下,此方法对Hg2+的线性检测范围为0.4～100 pmol/L,检出限为0.3 pmol/L(S/N=3),回归方程为△A420 nm=0.1+0.0019CHg2+(pmol/L).当共存离子大量存在时,传感器对Hg2+仍然具有高的选择性.应用于尿液样品中Hg2+检测,加标回收率为94.0％ ～106.0％,相对标准偏差(RSD)为1.4％ ～2.6％.此方法具有良好的选择性、灵敏度及抗干扰能力,可用于复杂样品中Hg2+的检测.

摘要:

设计了一种Hg2+触发的核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)辅助的双发夹探针双循环等温信号放大策略,在此基础上发展了一种免标记、超灵敏的Hg2+生物传感器.在Hg2+存在情况下,发夹探针1的3'游离序列与汞离子识别探针通过T-Hg2+-T配位结合形成双链DNA平末端,核酸外切酶ExoⅢ能识别双链DNA平末端并沿3'-5'方向催化水解茎部序列.释放的Hg2+和识别探针进入新一轮反应循环(循环1);释放的发夹探针1未降解序列包含Ⅰ区序列和G-四链体形成序列,其中,Ⅰ区序列与发夹探针2的3'游离序列(Ⅰ*区序列)完全互补,引发了ExoⅢ参与的双链DNA平末端水解,释放的Ⅰ区序列进入新一轮反应循环(循环2).循环1和2为自发循环过程,经过多次循环可以产生大量单链的G-四链体序列.体系中加入氯化血红素,与G-四链体结合形成G-四链体-血红素-DNA酶,催化ABTS-H2 O2反应体系显色.考察了多种因素对检测体系的影响,在最优实验条件下,此方法对Hg2+的线性检测范围为0.3～50 pmol/L,检出限为0.25 pmol/L(S/N=3),回归方程为 ΔA420 nm=0.117+0.004CHg2+(pmol/L).当水样中存在大量其它金属离子时,传感器对Hg2+仍然具有较高的选择性.将此方法应用于环境水体中Hg2+含量检测,加标回收率为96.0％ ～106.0％.本方法操作简单、选择性好、灵敏度高、有较强的抗干扰性能,可用于环境水样中Hg2+的高灵敏检测.