摘要:

目的探讨槲皮素对NB4，HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。方法以NB4，HL60细胞为研究对象，细胞形态学观察采用Wright’s染色法及荧光染色法；PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术；PML mRNA表达采用RT-PCR法。结果 1)经槲皮素处理后，各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2)槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解，PML聚积于POD结构，随后降解；在HL-60细胞，PML发生相似改变。3)槲皮素处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论在槲皮素诱导下，PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制；槲皮素能诱导NB4，HL-60细胞凋亡，抑制白血病细胞生长。

摘要:

目的:为探讨Wortmannin抑制磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)途径对K562,NB4细胞增殖的影响,探寻慢性髓细胞性白血病(CML)的治疗新途径.方法:用磷酰肌醇-3激酶(PI-3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI-3K活性,观察慢性髓细胞性白血病细胞系K562细胞和急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞在24,48,72 h增殖能力的变化.t检验统计分析.结果:K562和NB4细胞在24,48,72 h的增殖抑制率分别为34.67%,57.46%,65.85% 和26.29%,5.51%,2.10% .集落形成实验以GM-CSF为主要生长刺激物的培养体系在37℃,5% CO2 孵箱培养14 d后细胞系的集落数和集落形成率分别为K562 :80.75±10.24 和16.15% ,K562+WT :38.00±12.75和7.60%,NB4:29.50±5.97和5.90%,NB4+WT:30.50±5.74和6.10% .集落形成抑制率为:52.94% 和3.39% .结论:Wortmannin可显著抑制K562细胞的增殖和集落形成,而对NB4细胞无明显影响(P均<0.05).Wortmannin可以通过抑制PI-3K通路抑制K562细胞的增殖,而对NB4细胞增殖无明显影响.

摘要:

目的研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响.方法采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达.结果10和30 mmol/L SeO2能抑制3种细胞增生.30 mmol/L SeO2作用48 h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达.结论SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控.

摘要:

目的 探讨威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制.方法 以NB4细胞为实验对象,1.0 μmol/L的三氧化二砷为阳性对照,0.01%DMSO为阴性对照,用不同浓度的威灵仙皂苷作为实验组,利用MTT法观察细胞的增殖抑制状态,瑞氏染色进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞凋亡率及进行细胞周期测定,Real-time PCR检测威灵仙皂苷干预细胞后PML-RARa mRNA的变化.结果 不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞增殖,具有时间和浓度依赖性,但抑制率低于砷剂组.瑞氏染色可见典型凋亡细胞的形态学改变,与砷剂组有同样的改变.流式细胞术检测发现凋亡细胞随时间延长而增多,组间差异有统计学意义,凋亡率低于砷剂组.细胞周期测定提示G2期细胞增多,G1期细胞明显减少,组间差异有统计学意义(P<0.05).威灵仙皂苷作用后的NB4玢细胞PML-SARa mRNA的表达无统计学意义(P>0.05).结论 威灵仙皂苷可能通过诱导NB4＆细胞凋亡抑制细胞生长,可能的机制是通过细胞周期阻滞,但不影响PML-RARa mRNA的表达.

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目的 探讨超抗原SEA体外增强PML-RARα多肽诱导特异性CTL杀伤活性的机制.方法 分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肤与正常人外周血单个核细胞共同培养,利用CCK-8比色法检测诱导后T细胞对NB4和K562细胞株杀伤活性,同时利用流式细胞术测定诱导T细胞表面CD4与CD8表达情况.结果 诱导后第20天,SEA能明显增强PML-RARα多肽特异性杀伤NB4细胞株的作用.诱导后第5、10、20天动态检测表明,多肽及SEA联合多肽组CD4+/CD8+比值逐渐降低,其中SEA联合PML-RARα多肽诱导组降低最显著.结论 超抗原SEA能明显增强PML-RARα多肽体外诱导特异性CD8+T细胞的增殖与特异性的杀伤作用.

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目的 探讨孕酮对K562和NB4白血病细胞系的抑制增殖和诱导分化作用.方法 采用细胞计数,XTT实验观察孕酮对白血病细胞增殖能力的影响,采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色,NBT还原实验和流式细胞术观察孕酮对白血病细胞的诱导分化作用.结果 不同浓度孕酮连续作用白血病细胞5天,液体培养显示细胞数明显减少,第5天处理组的XTT值显著低于对照组,并呈剂量依赖关系;液体培养和XTT均显示孕酮对NB4细胞的增殖并无显著影响.K562细胞联苯胺染色OD值显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),NB4细胞NBT还原能力提高(P＜0.01),并呈剂量依赖性.形态学观察孕酮可诱导K562细胞和NB4细胞趋向成熟分化,流式细胞术检测孕酮处理后K562和NB4细胞膜CD71和CD11b分化抗原表达阳性率分别为85.72%和61.28%.结论 孕酮可显著抑制K562白血病细胞增殖,诱导K562和NB4白血病细胞向成熟分化.

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目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的线粒体传导通路的影响.方法 将不同浓度的TA(200、300、400 μg/ml)作用于NB4细胞,体外培养48 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;采用RT-PCR测定细胞内Bcl-2和Bax mRNA变化;使用分光光度法测定细胞内caspase-3的活性变化.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),在TA(200、300、400 μg/ml)组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度组Bcl-2 mRNA及线粒体膜电位的表达明显下降,caspase-3的表达明显升高(P<0.05);Bax mRNA的表达无明显差异.结论 TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应,并且可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡.

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目的 构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株,探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响,为研究NE致白血病的可能机制奠定基础.方法 以质粒pCMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE,将NE基因连接到穿梭载体pGLV10/U6/GFP/Puro后酶切验证,将序列正确的质粒与包装质粒pGag/Pol、pRey、pVSV-G共转染293T细胞.测定病毒滴度.实验分为空白组、LV5-NC组和LV5-NE组,病毒感染NB4细胞72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞.用Westemblot检测NE在NB4细胞中的蛋白表达以及其切割作用;CCK-8法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞周期和凋亡;Western blot检测pAkt和Akt以及Bax和Bcl-2蛋白表达.结果 成功构建表达NE的慢病毒LV5-NE,筛选得到纯NB4/LV5-NE细胞株,NE对NB4细胞的增殖有明显促进作用(P＜0.05)结论NE在NB4细胞株中稳定表达后中可促进NB4细胞的增殖,其增殖作用可能通过激活PI3K/Akt通路调节.

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目的 构建携带PML(△NLS)基因的重组慢病毒,研究其对NB4细胞中c-Myc蛋白表达的影响.方法 以质粒pCMV-HA-PML(△NLS)为模板,PCR扩增PML(△NLS)基因,克隆入慢病毒载体LV5-EF1a-GFP/puro,与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,包装病毒.收取病毒上清液,纯化后感染NB4细胞,荧光倒置显微镜观察感染效率,RT-PCR法检测PML(△NLS) mRNA的转录水平,Western blot检测PML(△NLS)、β-catenin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达的变化.CCK-8实验观察细胞增殖.结果 成功构建PML(△NLS)过表达慢病毒,病毒感染NB4细胞,感染效率达82.74％,LV5-PML(△NLS)携带的PML(△NLS)能够在NB4细胞中稳定表达;感染LV5-PML(△NLS)的NB4细胞中β-catnin、γ-catenin和c-Myc蛋白表达下降(P＜0.05);NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和空病毒载体组(P＜0.05).结论 成功构建了重组慢病毒PML(△NLS),PML(△NLS)过表达可促进NB4细胞体外增殖,并抑制c-Myc蛋白表达.

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目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制.方法 不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况.采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡；Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RTPCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达.结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用.20～80 μmol/L塞来昔布作用24 h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05)；塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05)；RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF 1α的mRNA表达.结论 塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.