脑钠肽与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达与分离纯化

• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脑钠肽 融合蛋白 表达 分离 纯化
• 年，卷（期）: 1998,（2）
• 页码范围: 55-60
• 页数: 6页
• 分类号: Q51,
• 语种: 中文

摘要

用PCR技术扩增获得脑钠肽－95CDNA,再由它获得脑钠肽－38CDNA(BNP－38CDNA),选用融合蛋白表达质粒PGEX－3X作载体,构建成谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和BNP－38的融合基因.该基因在大肠杆菌JM109中表达的最佳体系是:以1∶10扩大培养4H加入终浓度为0?5MMOL/L的诱导剂IPTG诱导培养4H,诱导表达的融合蛋白量可达56μG/ML培养液,是国外文献的3?73倍.用GST－A?GAROSEBEADS进行动态吸附,分离出的融合蛋白量可达国外文献的15倍.用还原型谷胱甘肽动态洗脱,纯化融合蛋白所得的量是静态洗脱的5?2倍.选用GST融合表达系统具有产量高、纯化快速简便的特点,而采用以上表达体系和分离纯化方案,又使融合蛋白得率提高四十多倍,这不仅为用核磁共振波谱研究BNP结构和功能关系进行大量的样品制备奠定了重要的基础,而且为国内普通实验室条件下进一步应用GST融合蛋白表达系统获得大量融合蛋白提供了有益的参考.