克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物

• 作者: 久野耕嗣 张淑英 松岛纲治 郭葆玉
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子克隆 超基因家族 同源引物
• 年，卷（期）: 1998,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 101-105
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.1998.02.001

摘要

目的:用同源引物克隆RNA低丰度表达的小鼠β-趋化因子受体.方法:将β-趋化因子受体小鼠MIP-1αR,人MCP-1R和大鼠IL-8R跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后,设计出同源引物,再用RT-PCR扩增出DNA片段,经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物,用Marathon PCR扩增出该新基因.结果:成功克隆出小鼠β-趋化因子受体5(CCR5) cDNA全基因序列,序列全长2 888 bp,开放阅读框1 065个核苷酸,编码355个氨基酸.该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员.结论:该克隆策略的引物设计思路较为新颖,能有效捕获超基因家族中的新基因.该克隆方法敏感、高效,对基因家族新基因的克隆具有广泛的意义.