利用中间偃麦草抗病基因同源序列分离黄矮病抗性候选基因克隆

• 作者: 刘耀光 张增艳 林志珊 王晓萍 许景升 辛志勇
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 中间偃麦草 黄矮病抗性 抗病基因同源序列 可转化人工染色体(TAC) 克隆池PCR
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 189-195
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0496-3490.2004.03.001

摘要

根据已克隆植物抗病(R)基因编码蛋白质的保守结构设计简并引物,利用同源序列法PCR扩增、克隆到9个具有开放阅读框的中间偃麦草R基因同源片段(Resistance Gene Analogs,RGAs).利用抗黄矮病材料(含Bdv2)、感黄矮病材料(无Bdv2)进行RFLP分析,筛选到1个NBS类RGA序列TirgaZ1与Bdv2连锁.根据TirgaZ1的序列重新设计1对引物,优化PCR扩增条件,将其转化为经典特异PCR标记(SC-TZ1).利用该特异PCR标记(SC-TZ1)和克隆池-PCR法筛选抗黄矮病小麦-中间偃草易位系HW642基因组的可转化人工染色体(Transformation-competent Artificial Chromosome,TAC)文库,分离到4个阳性TAC克隆T1～T4.限制酶切图谱分析结果表明,T1～T3为1类,插入片段约23 kb,T4为另1类,插入片段约为25 kb.以TirgaZ1为探针,通过Southern杂交证实了阳性TAC克隆T1、T4为含有TirgaZ1序列的抗病基因候选克隆.分别以中间偃麦草、HW642和小麦亲本为探针对阳性克隆T1、T4进行Southern分析,结果表明,阳性TAC克隆T1、T4的插入片段均具有抗黄矮病易位系的中间偃麦草易位染色体片段7XL,T1、T4为抗黄矮病基因候选克隆.测定和分析阳性克隆T1插入片段5＇端-6 448 bp部分的序列,表明其最长完整开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)为2 675 bp,其编码产物具有信号肽、低复杂性结构、NB-ARC、跨膜域等结构,与已克隆的NBS-LRR类抗病基因RPP13、I2C等具有同源性.抗黄矮病基因候选克隆T1、T4的生物学功能有待通过转化、抗病鉴定进行验证.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张增艳	中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室	32	724	14.0	26.0
2	刘耀光	华南农业大学生物技术学院	37	679	17.0	25.0
3	许景升	中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室	20	132	6.0	10.0
4	王晓萍	中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室	4	123	3.0	4.0
5	林志珊	中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室	9	141	6.0	9.0