HCV5′NCR和结构蛋白编码序列的拼接及在pLNSX中的克隆

• 作者: 付涌水 冯炼强 刘亚光 吕凌 曹开源
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 克隆,分子 聚合酶链反应 肝炎病毒,丙型
• 年，卷（期）: 2000,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 809-813
• 页数: 5页
• 分类号: R512.6+3
• 字数: 3148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2000.09.010

摘要

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV) 5′末端非编码区(5′NCR)和结构蛋白编码基因序列逆转录病毒重组体,用于探索控制HCV感染的新途径和基因治疗.方法:对多株HCV核酸序列进行同源性比较设计引物,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′NCR、C、E1和E2/NS1 4个编码区共5个片段,分别克隆.以连接聚合酶链反应(PCR)将这5个片段拼接为一连续的长2547 nt的片段,含HCV完整的5′NCR和全部的结构蛋白编码序列.将此序列插入pGEM-Zf(+)载体,与逆转病毒pLNSX载体中,转化大肠杆菌DH5a、转化菌落经酶切、PCR和Southern杂交鉴定.结果:通过RT-PCR和连接聚合酶链式反应(PCR)扩增出2547 nt含HCV完整的5′NCR和全部的结构蛋白编码序列,将此序列与pGEM-Zf(+)重组得重组体pHC2547,与逆转录病毒载体pLNSX重组得pLHC.结论:成功构建了HCV逆转病毒重组体,以利于HCV的胞内基因表达调控研究,更为探索HCV分子致病机制和转基因动物及基因治疗提供可靠的物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亚光	中山医科大学第一附属医院肾内科	5	18	1.0	4.0
2	曹开源	中山医科大学免疫学教研室	6	35	3.0	5.0
3	吕凌	中山医科大学分子医学研究中心	2	1	1.0	1.0
4	冯炼强	中山医科大学免疫学教研室	4	10	2.0	3.0
5	付涌水	中山医科大学分子医学研究中心	2	1	1.0	1.0