大肠杆菌偏嗜性人促甲状腺激素β亚基编码DNA序列的克隆及表达

• 作者: 孙蓓 张镜宇 王宝利 赵学勤 郭刚 马彦 马香书
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 促甲状腺素 大肠杆菌 密码子 克隆,生物 基因表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 340-342
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2009.05.002

摘要

目的:构建PGEX-3X/大肠杆菌偏嗜性人促甲状腺激素(hTSH)13DNA编码序列原核表达载体,并在E.coliDH5α中进行表达,用于GD(Graves diease)的实验研究.方法:用大肠杆菌偏嗜性密码子替换已知hTSHβ亚基基因编码序列中相应的密码子,按重新设计后的编码序列进行DNA化学合成,然后克隆入表达载体pGEX-3X并进行酶切电泳、测序鉴定,进而在E.coli DH 5α中进行诱导表达.对所表达的GST融合蛋白进行SDS-PAGE、Western blotting及hTSH电化学发光免疫测定.结果:经鉴定,重组质粒pGEX-3X/hTSHβ含有与预期结果一致的435 bp编码hTSHβ链的DNA序列.表达产物为hTSHβ与GST融合蛋白.分子质量约42 ku,于SDS-PAGE中的相应部位可见深染的特异性蛋白条带,可被GST抗体识别并可被抗hTSH抗体检测.结论:实验成功建立了hTSHβ肽链的体外表达系统,为进一步制备hTSHAb及进行GD的研究奠定了基础.