扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的融合PCR方法

• 作者: 于曼 杨佩英 秦鄂德 胡志君 范宝昌 赵卫 陈水平
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 登革热病毒 全长cDNA 长链逆转录PCR 融合PCR
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 137-139
• 页数: 3页
• 分类号: R373.33
• 字数: 2843字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2001.02.016

摘要

目的:建立扩增登革2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径.方法:根据我国登革2型病毒D2-43株序列设计引物,首先采用长链RT-PCR技术扩增病毒基因组5′及3′半分子,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子.为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性,再以融合PCR产物为模板扩增5′非编码区序列,与pGEM-T载体连接,在377A型自动测序仪进行序列分析.结果:通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法.扩增的我国登革2型病毒的5′及3′半分子的长度均为5 kb左右,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约11 kb,与预期大小一致,非编码区测序结果表明扩增产物为D2-43所特有.结论:所建立的融合PCR方法是构建登革病毒基因组全长cDNA的有效技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦鄂德	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	75	476	11.0	17.0
2	于曼	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	43	174	7.0	9.0
3	陈水平	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	37	147	7.0	9.0
4	胡志君	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	16	70	6.0	8.0
5	范宝昌	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	17	91	6.0	9.0
6	赵卫	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	16	106	6.0	10.0
7	杨佩英	军事医学科学院微生物学流行病学研究所	27	182	8.0	12.0