摘要:
本实验所用的马传染性贫血病毒(EIAV)L株(EIAV L)是我国研制成功的EIAV弱毒疫苗的原始强毒株.以EIAV-L感染马外周血液白细胞中DNA为模板,利用PCR技术,分4个片段扩增EIAV L前病毒DNA,并分别克隆到载体质粒pBluescript SK中,得到4个重组质粒p2.8、p2.4、p3.1和p1.2,经酶切鉴定后测序.对测序结果分析、拼接,得到EIAV L前病毒基因组全序列.EIAV L前病毒基因组全长8235bp,其中G+C含量为38%.通过使用计算机软件DNASIS分析,EIAV-L与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为98.4%和96.9%.同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系,另外EIAV-L与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性,这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程.基因组两端是长为316bp的LTR,其中U3为197bp,R为80bp,U5为39bp.前病毒基因组有3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码gag、pol和env基因.gag基因位于71 3~1 91 2位碱基之间,全长1 200bp;pol基因位于1 708~5109位碱基之间,全长3402bp;env基因内出现一个框内终止密码子,使其分为两个部分,env1位于5305~6003位碱基之间,长为699bp;env2位于6073~7899之间,长为1 827bp.此外,前病毒还有3个小的ORF,S1位于5113~5265位碱基之间,长为153bp;S2位于5279~5 482位碱基之间,长为204bp;S3位于724 5~7646位碱基之间,长为402bp.