弓形虫侵入相关分子棒状体蛋白1基因重组质粒的克隆及其DNA免疫研究

• 作者: 吕芳丽 郑焕钦 郭虹 陈观今
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 棒状体蛋白1 pcROP1重组质粒 克隆 DNA免疫
• 年，卷（期）: 2001,（8）
• 页码范围: 837-840
• 页数: 4页
• 分类号: R53
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2001.08.013

摘要

目的构建含编码弓形虫棒状体蛋白1基因的重组质粒，将该重组质粒DNA免疫小鼠，观察其所诱导的免疫保护性反应。 方法用PCR技术从弓形图ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白1（ROP1）的基因片段，重组入pUC18-ROP1中的ROP1外源基因片段经酶切，连接等反应，亚克隆入pcDNA3真核表达载体，再经含氨苄LB培养基筛选，酶切，PCR鉴定：获取阳性克隆并大量制备，肌注法DNA免疫BALB/C小鼠，每只鼠100?μg,两周后同量加强免疫一次，以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照。分别于加强免疫后30d,50d,70d,用MTT法测定小鼠睥脏NK细胞活性，T淋巴细胞增殖活性，间接免疫荧光法记数T细胞亚群及ELISA检测血清IgG抗体。 结果从ZS2株基因DNA中扩增出特异的ROP1基因片段并经TaqI酶切鉴定：克隆成功pcROP1重组质粒。用该质粒免疫小鼠30天后，脾脏明显增大；三次测定结果免疫组脾T淋巴细胞增值活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。NK细胞杀伤活性免疫组钧高于对照组。T细胞亚群，CD4+细胞数与对照组相比，无明显变化，而CD8+细胞数显著增高（P<0.05）。血清抗体IgG 70d内检测结果8，与对照相比，无明显增高；而免疫后90d检测，明显增高。抗体滴度为本：1∶100。 结论构建成功弓形虫pcROP1重组质粒，免疫小鼠后，该质粒诱导小鼠产生细胞及体液免疫应答。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭虹	中山医科大学寄生虫学研究所	17	194	9.0	13.0
2	陈观今	中山医科大学寄生虫学研究所	26	228	9.0	13.0
3	吕芳丽	中山医科大学寄生虫学研究所	8	72	3.0	8.0
4	郑焕钦	中山医科大学寄生虫学研究所	17	171	8.0	12.0