重组日本血吸虫特异性IgE相关蛋白的纯化及免疫学活性鉴定

• 作者: 刘丰 吴观陵 季旻珺 张兆松 朱翔 李春林 王勇 胡雪梅 苏川
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 IgE 融合蛋白 包涵体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 141-144
• 页数: 4页
• 分类号: R383.24
• 字数: 3564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7423.2002.03.004

摘要

目的纯化重组日本血吸虫特异性IgE抗体相关蛋白和鉴定其免疫原性.方法大量表达Sj43B/pGEX-6p-1/BL21重组克隆菌,超声粉碎后离心获得融合表达的重组蛋白包涵体.经TNMFX缓冲液分步洗涤后,将包涵体溶解液经FPLC分离,获得重组融合蛋白组分,再经巯基二硫键转换复性后,用于免疫小鼠获得抗血清,分别用dot ELISA法和Western blotting法对融合蛋白引起的特异性血清抗体同型反应进行鉴定.结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,FPLC分离可获得高纯度重组蛋白.用复性后的重组融合蛋白免疫小鼠,其中目的蛋白可引起特异性IgE抗体反应,而担体蛋白26 kDaGST不引起特异性IgE应答,可引起特异性IgG抗体反应,目的蛋白则否.结论重组质粒Sj43B/pGEX-6p-1表达的融合蛋白,其目的蛋白部分免疫小鼠可产生特异性IgE抗体.