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摘要:
采用RT-PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B lymphocyte stimulator, hsBLyS)的cDNA片段, 再运用基因重组手段, 利用通用型质粒pBV220构建表达载体pBV220/hsBLyS. 经测序鉴定后, 以之为模板使用重叠PCR法扩增得到hsBLyS的两个点突变体hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 构建表达载体pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V. 经测序无误后, 将上述3种载体分别转化大肠杆菌DH5α并诱导重组蛋白质表达, 薄层扫描结果显示3种蛋白质在DH5α中表达量都在20%~30%之间. 再分别运用变性、 凝胶过滤层析及复性等手段纯化目的蛋白质, 最后通过B淋巴细胞增殖实验检测纯化产物促人B细胞增殖的活性. 实验结果表明, 3种重组蛋白质都能明显刺激人B细胞增殖; 统计学检验显示, 突变体rhsBY-V较野生型rhsBLyS的促人B淋巴细胞增殖活性显著增强.
内容分析
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文献信息
篇名 重组人可溶性B淋巴细胞刺激因子及其突变体的克隆、表达及活性测定
来源期刊 生物化学与生物物理学报 学科 生物学
关键词 hsBLyS 突变体 原核表达 包涵体 细胞增殖
年,卷(期) 2002,(6) 所属期刊栏目 研究论文
研究方向 页码范围 731-736
页数 6页 分类号 Q78
字数 语种 英文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王嘉玺 军事医学科学院基础医学研究所 57 335 9.0 16.0
2 邹民吉 军事医学科学院基础医学研究所 39 238 6.0 14.0
3 陈光宇 军事医学科学院基础医学研究所 11 35 4.0 5.0
4 彭善云 军事医学科学院基础医学研究所 15 25 3.0 4.0
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研究主题发展历程
节点文献
hsBLyS
突变体
原核表达
包涵体
细胞增殖
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
生物化学与生物物理学报(英文版)
月刊
1672-9145
31-1940/Q
16开
上海市岳阳路319号31-B
4-210
1961
eng
出版文献量(篇)
3098
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1
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