重组人可溶性B淋巴细胞刺激因子及其突变体的克隆、表达及活性测定

• 作者: 彭善云 王嘉玺 邹民吉 陈光宇
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: hsBLyS 突变体 原核表达 包涵体 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 731-736
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

采用RT-PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性B淋巴细胞刺激因子(human soluble B lymphocyte stimulator, hsBLyS)的cDNA片段, 再运用基因重组手段, 利用通用型质粒pBV220构建表达载体pBV220/hsBLyS. 经测序鉴定后, 以之为模板使用重叠PCR法扩增得到hsBLyS的两个点突变体hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 构建表达载体pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V. 经测序无误后, 将上述3种载体分别转化大肠杆菌DH5α并诱导重组蛋白质表达, 薄层扫描结果显示3种蛋白质在DH5α中表达量都在20%～30%之间. 再分别运用变性、 凝胶过滤层析及复性等手段纯化目的蛋白质, 最后通过B淋巴细胞增殖实验检测纯化产物促人B细胞增殖的活性. 实验结果表明, 3种重组蛋白质都能明显刺激人B细胞增殖; 统计学检验显示, 突变体rhsBY-V较野生型rhsBLyS的促人B淋巴细胞增殖活性显著增强.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王嘉玺	军事医学科学院基础医学研究所	57	335	9.0	16.0
2	邹民吉	军事医学科学院基础医学研究所	39	238	6.0	14.0
3	陈光宇	军事医学科学院基础医学研究所	11	35	4.0	5.0
4	彭善云	军事医学科学院基础医学研究所	15	25	3.0	4.0