一种人新型基因工程干扰素rh-IFNα-m的高效表达、纯化和活性检测

• 作者: 侯云德 刘永清 吕宏亮 李武平 段招军 陈勇 魏开坤
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: IFNα-m 高效表达 纯化 抗病毒 抗增殖
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 分子生物技术
• 页码范围: 22-25
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33
• 字数: 2449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-5673.2002.02.006

摘要

为实现干扰素(IFNα-m)的高表达与纯化,研究其抗病毒、抗增殖活性.应用PCR技术将已构建的IFNα-m的高表达基因亚克隆到原核表达载体pBV220上,构建表达质粒pBV220/IFNα-m,转化大肠杆菌DH5α进行表达.表达产物经初步检定以包涵体形式存在,包涵体进行变性、复性,然后经CM-Sepharose-FF、DEAE-Sepharose-FF离子交换层析和Sephacryal-HR100分子筛纯化,获得较纯的干扰素IFNα-m.以IFNα-1b为对照,在VSV-Wish系统上采用细胞病变抑制法,测定纯品IFNα-m的抗病毒活性.在Hela细胞上用MTT法进行抗增殖实验.结果表明包涵体含量占菌体总蛋白40%,纯化的目的蛋白IFNα-m纯度在95%,比活高达1.26×107IU/mg,纯化收率34.4%,IFNα-m抗病毒活性和IFNα-1b相当(P》0.05),抗增殖活性高于IFNα-1b(P《0.01).