基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

• 作者: 何龙 厉永建 张意 张明徽 施群英 曹雪涛 王全兴 蒋应明 陈国友 黄欣
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 工学
• 关键词: β-干扰素 蛋白纯化 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 130-133
• 页数: 4页
• 分类号: TQ929+.1|TQ937
• 字数: 2636字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2001.02.014

摘要

目的: 摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法: 研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果： 17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中，17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4 h后的表达量最高，目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中，纯度达80%，经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%，用G25柱转换缓冲液，使缓冲液pH值＞8，同时去除缓冲液中的还原剂DTT，将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制，最终获得纯度＞98%和比活性>3×107 U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论： 成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺，为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹雪涛	第二军医大学免疫学研究所	117	1522	19.0	34.0
2	黄欣	第二军医大学免疫学研究所	16	66	4.0	7.0
3	蒋应明	第二军医大学免疫学研究所	12	49	4.0	6.0
4	厉永建	第二军医大学免疫学研究所	14	76	5.0	8.0
5	陈国友	第二军医大学免疫学研究所	14	65	5.0	7.0
6	王全兴	第二军医大学免疫学研究所	42	171	9.0	10.0
7	张明徽	第二军医大学免疫学研究所	21	127	5.0	10.0
8	何龙	第二军医大学免疫学研究所	7	71	5.0	7.0
9	张意	第二军医大学免疫学研究所	11	36	3.0	5.0
10	施群英	第二军医大学免疫学研究所	2	17	2.0	2.0