丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶抗原性分析及特异性抗体制备

• 作者: 侯利华 刘树玲 杜桂鑫 王海涛 陈万荣
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 抗原性 单克隆抗体 丝氨酸蛋白酶
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 393-397
• 页数: 5页
• 分类号: R37
• 字数: 5314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.04.014

摘要

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白酶的抗原性并制备特异性抗体. 方法构建表达质粒并且在大肠杆菌中可溶性表达单链型丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶;以纯化后的重组蛋白包被酶联板对86份献血员和12份健康人血清中的特异性抗体进行检测;将纯化蛋白偶联到Sepharose 4B上制备亲和纯化柱,对丙肝病毒感染者血清中的特异性抗体进行亲和纯化;以纯化蛋白免疫小鼠,制备特异性单克隆抗体,对纯化后的人多抗和鼠单抗进行鉴定. 结果以纯化的重组单链丝氨酸蛋白酶为抗原检测98份血清,结果阳性率为73.9%,商品试剂盒漏检的1份血清中也检测出特异性抗体.用重组蛋白从200ml HCV感染者血清中亲和纯化到4.57mg多克隆抗体,效价达107,特异性很好.制备的4株IgG类鼠单抗,无交叉反应,能够被人血清抗体竞争性抑制. 结论表达的HCV丝氨酸蛋白酶具有良好的抗原性,在HCV感染人群中该区域抗体的阳性率较高,制备了特异性很好的多克隆抗体和单克隆抗体.