大鼠白细胞介素10(IL-10)cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 畅继武 陈家存 马腾骧
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 白细胞介素-10 cDNA 克隆 表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2002,（7）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 461-463
• 页数: 3页
• 分类号: Q781
• 字数: 2697字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆大鼠白细胞介素10(IL-10)cDNA的全长序列,并使其在大肠杆菌中表达,为其分子生物学利用奠定基础.方法:无菌条件下切取大鼠的脾脏,收获脾细胞,用LPS刺激培养4 h;提取细胞的总RNA,用RT-PCR技术克隆IL-10cDNA的全长序列;经测序后将IL-10cDNA插入表达载体pJW2,转染DH5α细胞后进行热诱导表达并对表达蛋白进行测定.结果:脾细胞经LPS刺激后IL-10转录水平增加,从提取的RNA易反转录并扩增出期望的PCR产物,测序结果表明得到的IL-10cDNA序列与基因库报告的序列完全一致.将其插入表达载体pJW2后经热诱导顺利表达出蛋白分子量与文献报道一致.Westem-blot分析表明表达的条带可与小鼠抗大鼠IL-10抗体特异性结合.结论:大鼠的IL-10 cDNA全长序列被成功克隆,克隆序列能够在大肠杆菌中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	畅继武		15	40	4.0	5.0
2	陈家存	徐州医学院附属医院泌尿外科	113	296	7.0	10.0
3	马腾骧		11	44	4.0	6.0