人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张胜权 徐从贞 方敏 罗欣
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素15/遗传学 大肠杆菌/遗传学 基因表达 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 491-493
• 页数: 3页
• 分类号: R342|R378.21|R392.12|R394|R341.7|R977.4
• 字数: 1892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2006.05.002

摘要

目的 克隆人白细胞介素(IL)15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达.方法 从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出hIL-15全长cDNA.构建到原核表达载体pET28a(+)中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,扩增后IPTG诱导表达.通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白.结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中.SDS-PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16.1 ku,与理论值相符.结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础.